期刊简介
本刊系教育部主管、四川大学华西医院主办，主要刊登普外专业和相关学科的临床成果，以及与临床联系紧密的基础研究、实验研究成果与进展，主要设有基础与实验研究、临床研究、临床经验交流、新术式及新技术介绍、论著摘要、腹部影像、讲座、继续教育问答、综述等栏目，并且根据普外专业特点每期就某一热点问题开设述评、专家论坛等栏目进行重点讨论。本刊为中国科技论文统计源期刊（中国科技核心期刊）、《中国科技引文数据库》及《中国学术期刊综合评价数据库》来源期刊，被俄罗斯文摘（AJ）、美国化学文摘（CA）以及国内CMB、CMCC、《中国期刊网》、《中国学术期刊（光盘版）》、《万方数据——数字化期刊群》等收录。
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首页>中国普外基础与临床杂志
- 杂志名称：中国普外基础与临床杂志
- 主管单位：中华人民共和国教育部
- 主办单位：四川大学华西医院
- 国际刊号：1007-9424
- 国内刊号：51-1505/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：1999年获四川省高等学校优秀学报优秀期刊奖期刊收录：上海图书馆馆藏, 维普收录(中), 万方收录(中), CA 化学文摘(美), 哥白尼索引(波兰), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中)
pEGFP-N3-TFPI-2真核表达载体的构建和鉴定
王健；王晓东；唐冠杰；赵佳
关键词：组织因子途径抑制物-2, pEGFP-N3真核载体, 双酶切反应, 序列分析, Western blot法
摘要：目的 构建pEGFP-N3-TFPI-2真核表达载体,为研究TFPI-2基因的功能做准备.方法 从胎盘组织中提取总RNA,逆转录合成cDNA,再以PCR法进行扩增.将扩增的TFPI-2基因片段克隆到pEGFP-N3真核表达载体上,经Xho Ⅰ和KpnⅠ双酶切后,行1％琼脂糖凝胶电泳鉴定,同时测定其DNA序列.将pEGFP-N3-TFPI-2真核表达载体以脂质体LipofectamineTM 2000介导的方法转染Topl0感受态细胞(转染组),同时设空白对照组(仅转染pEGFP-N3质粒)和未转染组(不予转染).采用Western blot法检测3组细胞中TFPI-2蛋白的表达情况.结果 总RNA经分光光度法验证,其纯度符合PCR法扩增的要求.构建的pEGFP-N3-TFPI-2真核表达载体经Xho Ⅰ和KpnⅠ双酶切后,行1％琼脂糖凝胶电泳,结果显示,分别在708 bp处和4 700 bp处有特异扩增条带,大小与理论值一致.DNA序列测定结果证实,pEFFP-N3-TFPI-2真核表达载体的序列完全正确.Western blot法结果显示,TFPI-2蛋白的表达量转染组为0.657 3±0.032 5,空白对照组为0.301 7±0.028 7,未转染组为0.314 3±0.026 6,转染组TFPI-2蛋白的表达量高于空白对照组和未转染组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 本实验成功构建了pEGFP-N3-TFPI-2真核表达载体,为TFPI-2基因功能的研究奠定了基础.
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