蛋白酶激活受体-2活化对胃癌MKN28细胞血管内皮细胞生长因子基因及蛋白表达的影响

摘要：目的 研究蛋白酶激活受体-2活化剂胰蛋白酶对胃癌MKN28细胞中血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的影响.方法 ①将MKN28细胞分别给予不同浓度(终浓度分别为0、0.1、1.0、10.0及100.0 nmol/L,干预时间均为6h)和不同时间(空白对照组加入PBS溶液,4个干预组胰蛋白酶的终浓度均为10.0 nmol/L,相应的干预时间分别为3、6、12及24 h)的胰蛋白酶干预后,检测MKN28细胞中VEGF mRNA及其蛋白的表达水平,并检测培养液中VEGF蛋白的浓度.②将MKN28细胞分别给予PBS溶液(空白对照组)、胰蛋白酶、胰蛋白酶+PD98059、胰蛋白酶+SB203580、PD98059及SB203580处理,检测MKN28细胞中VEGF mRNA及其蛋白的表达水平.细胞中VEGF mRNA及其蛋白表达水平的检测分别采用荧光定量PCR法和Western blot法,培养液中VEGF蛋白浓度的检测采用酶联免疫吸附实验(ELISA).结果 ①胰蛋白酶浓度的影响.与空白对照组比较,0.1、1.0、10.0及100.0 nmol/L组细胞中VEGF mRNA及其蛋白的表达水平均较高(P＜0.05);与0.1 nmol/L组比较,1.0、10.0及100.0 nmol/L组细胞中VEGF mRNA及其蛋白的表达水平均较高(P＜0.05);与1.0 nmol/L组比较,10.0及100.0 nmol/L组细胞中VEGF mRNA及其蛋白的表达水平均较高(P＜0.05),但10.0 nmol/L组与100.0 nmol/L组细胞中VEGFmRNA及其蛋白的表达水平比较差异均无统计学意义(P＞0.05).空白对照组、0.1 nmol/L组、1.0 nmol/L组、10.0 nmol/L组及100.0 nmol/L组培养液中VEGF蛋白的浓度逐渐递增(P＜0.05).②胰蛋白酶作用时间的影响.空白对照组、3h组、6h组、12h组及24h组细胞中VEGF mRNA的表达水平逐渐递增,5组间两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05).与空白对照组比较,3、6、12及24 h组细胞中VEGF蛋白的表达水平均较高(P＜0.05);与3h组比较,6、12及24h组细胞中VEGF蛋白的表达水平均较高(P＜0.05),但6、12及24h组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).空白对照组、3h组、6h组、12h组及24h组培养液中VEGF蛋白的浓度逐渐递增,5组间两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05).③细胞外调节蛋白激酶(ERK)抑制剂(PD98059)及p38抑制剂(SB203580)的作用.空白对照组、胰蛋白酶+PD98059组、胰蛋白酶+SB203580组、PD98059组和SB203580组细胞中VEGF mRNA及其蛋白的表达水平比较差异均无统计学意义(P＞0.05),但胰蛋白酶组细胞中VEGF mRNA及其蛋白的表达水平均较其余5组相应指标高(P＜0.01).结论 激活MKN28细胞表面的PAR-2可以上调VEGF mRNA及其蛋白的表达,且这一过程受ERK1/2和p38信号通路调控.