期刊简介
本刊系教育部主管、四川大学华西医院主办，主要刊登普外专业和相关学科的临床成果，以及与临床联系紧密的基础研究、实验研究成果与进展，主要设有基础与实验研究、临床研究、临床经验交流、新术式及新技术介绍、论著摘要、腹部影像、讲座、继续教育问答、综述等栏目，并且根据普外专业特点每期就某一热点问题开设述评、专家论坛等栏目进行重点讨论。本刊为中国科技论文统计源期刊（中国科技核心期刊）、《中国科技引文数据库》及《中国学术期刊综合评价数据库》来源期刊，被俄罗斯文摘（AJ）、美国化学文摘（CA）以及国内CMB、CMCC、《中国期刊网》、《中国学术期刊（光盘版）》、《万方数据——数字化期刊群》等收录。
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首页>中国普外基础与临床杂志
- 杂志名称：中国普外基础与临床杂志
- 主管单位：中华人民共和国教育部
- 主办单位：四川大学华西医院
- 国际刊号：1007-9424
- 国内刊号：51-1505/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：1999年获四川省高等学校优秀学报优秀期刊奖期刊收录：上海图书馆馆藏, 维普收录(中), 万方收录(中), CA 化学文摘(美), 哥白尼索引(波兰), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中)
c-Met基因慢病毒载体的构建及其配体肝细胞生长因子对SW480细胞侵袭能力的影响
姚建锋；孙学军；阎立昆；李小军；贺赛；郑见宝；张晓龙；王小强
关键词：c-met蛋白, 肝细胞生长因子, 慢病毒, SW480细胞, 侵袭
摘要：目的 观察慢病毒介导的RNA干扰c-Met基因后肝细胞生长因子(HGF)对结肠癌细胞株SW480侵袭能力的影响.方法 实验分为3组,正常对照组(NC组):正常目的细胞加shRNA阴性对照病毒感染细胞(NC组又分为NC-20和NC-40 2个亚组,分别代表正常目的细胞感染shRNA阴性对照病毒后在Transwell外室中分别加入浓度为20和40 ng/mL的HGF);c-Met基因敲除组(KD组):正常目的细胞加RNA干扰靶点病毒感染细胞(KD组又分为KD-20和KD-40 2个亚组,分别代表正常目的细胞感染目的基因shRNA-c-Met病毒后在Transwell外室中分别加入浓度为20和40 ng/mL的HGF;KD1、KD2、KD3和KD4组分别表示针对目的基因不同的RNA干扰靶点,以挑选其中有效的干扰靶点);空白对照组(CON组):正常目的细胞加未感染任何病毒的细胞.构建shRNA-c-Met慢病毒表达载体,实时定量PCR (RT-PCR)筛选阳性克隆并测序鉴定;经慢病毒质粒包装后转染SW480细胞,转染48 h后,RT-PCR法检测SW480细胞中c-Met mRNA表达,Western blot法检测SW480细胞中c-Met蛋白表达水平;转染72h后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力.结果 shRNA-c-Met慢病毒表达载体构建成功;shRNA-c-Met显著下调了SW480细胞中c-MetmRNA的表达,并且RNA干扰靶点病毒感染细胞第4靶点时的基因敲减效率高(81.4％),为有效靶点.Western blot检测结果显示,KD组SW480细胞中c-Met蛋白表达明显低于NC组(P=0.015)和CON组(P=0.010),KD组SW480细胞凋亡率明显高于NC组(P＜0.001)和CON组(P＜0.001).细胞转移率在KD组、KD-20组和KD-40组均分别明显低于NC组(P＜0.001)、NC-20组(P=0.015)及NC-40组(P=0.017);与NC组比较,NC-20组和NC-40组的细胞转移率明显升高(P＜0.001、P＜0.001),且NC-40组的细胞转移率明显高于NC-20组(P=0.005);同样,与KD组比较,KD-20组和KD-40组的细胞转移率均明显升高(P＜0.001、P＜0.001),KD-40组的细胞转移率明显高于KD-20组(P=0.014).结论 以c-Met为靶点的RNA干扰能明显下调结肠癌细胞株SW480中c-Met的表达,c-Met的表达下调能明显增加细胞凋亡且能降低HGF对SW480细胞侵袭能力的影响.
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