期刊简介
本刊系教育部主管、四川大学华西医院主办，主要刊登普外专业和相关学科的临床成果，以及与临床联系紧密的基础研究、实验研究成果与进展，主要设有基础与实验研究、临床研究、临床经验交流、新术式及新技术介绍、论著摘要、腹部影像、讲座、继续教育问答、综述等栏目，并且根据普外专业特点每期就某一热点问题开设述评、专家论坛等栏目进行重点讨论。本刊为中国科技论文统计源期刊（中国科技核心期刊）、《中国科技引文数据库》及《中国学术期刊综合评价数据库》来源期刊，被俄罗斯文摘（AJ）、美国化学文摘（CA）以及国内CMB、CMCC、《中国期刊网》、《中国学术期刊（光盘版）》、《万方数据——数字化期刊群》等收录。
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首页>中国普外基础与临床杂志
- 杂志名称：中国普外基础与临床杂志
- 主管单位：中华人民共和国教育部
- 主办单位：四川大学华西医院
- 国际刊号：1007-9424
- 国内刊号：51-1505/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：1999年获四川省高等学校优秀学报优秀期刊奖期刊收录：上海图书馆馆藏, 维普收录(中), 万方收录(中), CA 化学文摘(美), 哥白尼索引(波兰), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中)
免疫磁珠及无血清悬浮培养法对肝癌干细胞的分离与富集
陈克霏；刘俊；李波
关键词：肝癌干细胞, 免疫磁珠分选, 流式细胞术, 无血清悬浮培养
摘要：目的 评估免疫磁珠分选技术分选肝癌干细胞的效率.方法 ①CD90的表达检测:采用免疫组织化学染色SP法检测8例正常肝组织、58例肝癌及其癌旁组织中CD90的表达.②细胞系筛选:将Huh-7、MHCC97-H、SMMC-7721及Be17402细胞系分为空白对照组和实验组(细胞数量均为5.5×105个,均为1孔),实验组细胞中加入5μLCD90-PE抗体,空白对照组加入5μL CD90-无荧光抗体.采用流式细胞术检测4种细胞系空白对照组和实验组的CD90+细胞比例,以筛选细胞.③免疫磁珠分选:将Huh-7和MHCC97-H细胞系分别进行磁珠标记后进行磁珠分选.收集流经磁珠分选柱(MS)后的细胞悬液1 mL,作为CD90-组;将MS移出磁场区域,加入1 mL PBS缓冲液快速冲洗至离心管中,标记为CD90+组;以未分选细胞作为空白对照组(加入CD90-无荧光抗体)和未分选实验组(加入CD90-PE抗体).对Huh-7细胞系进行二次分选.采用流式细胞仪检测4组细胞中的CD90+细胞比例.④无血清培养和含血清培养:将Huh-7细胞接种到无血清培养基专用6孔板中进行培养(无血清和含血清悬浮培养均为l孔),1周后采用流式细胞仪检测无血清培养和含血清培养后细胞中的CD90+细胞比例.结果 ①正常肝组织中CD90的表达阳性率为0(0/8),肝癌组织为65.5％ (38/58),癌旁组织为20.7％(12/58).肝癌组织中CD90的表达阳性率较正常肝组织(x2=6.78,P＜0.05)和癌旁组织高(x2=20.83,P＜0.05).②Huh-7、MHCC97-H、SMMC-7721及Be17402细胞系中实验组的CD90+细胞比例分别为0.851％、1.090％、2.710％及4.050％,空白对照组分别为0.241％、0.688％、1.890％及2.080％,故选择Huh-7和MHCC97-H细胞系进行下一步的免疫磁珠分选.③Huh-7细胞经一次分选后:未分选空白对照组的CD90+细胞比例为0.241％,未分选实验组为0.851％,CD90-组为0.574％,CD90+组为1.100％;二次分选后:未分选空白对照组的CD90+细胞比例为0.032％,未分选实验组为0.961％,CD90-组为0.426％,CD90+组为9.700％.结论 正常肝组织实质细胞不表达CD90,肝癌组织高表达CD90.肝癌细胞系Huh-7和MHCC97-H中存在少量的CD90+细胞,免疫磁珠分选法能明显提高CD90+细胞比例,但作用十分有限.无血清悬浮培养法对富集CD90+细胞无明显作用.
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